人神经营养素3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定
袁健东,郎俊哲,沈翠华,傅强
温州医学院附属第一医院骨科,浙江温州,325000 第二军医大学附属长海医院骨科,上海,200433
Construction and identification of the recombinant lentiviral vector expressing human neurotrophin-3 gene
YUAN Jiandong,LANG Junzhe,SHEN Cuihua,FU Qiang
引用本文:
袁健东,郎俊哲,沈翠华,等. 人神经营养素3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 温州医科大学学报, 2013, 43(6): 351-354.
Cite this article:
YUAN Jiandong,LANG Junzhe,SHEN Cuihua, et al. Construction and identification of the recombinant lentiviral vector expressing human neurotrophin-3 gene[J]. JOURNAL OF WEZHOU MEDICAL UNIVERSITY, 2013, 43(6): 351-354.
摘要 目的:构建携带人神经营养素3 (hNT3)基因的重组慢病毒表达载体.方法:通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGC-E1-hNT3-EGFP质粒,将该质粒转化大肠杆菌DH5α,通过PCR、酶切、测序和对比验证hNT3,通过Lipofectamine 2000将pGC-E1-hNT3-EGFP、pHe1per 1.0和pHe1per 2.0三质粒系统共转染293T细胞包装病毒,经大量扩增后,应用实时定量PCR法鉴定和测定滴度.结果:克隆得到512 bp目的hNT3全长基因,经过PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实,hNT3基因成功克隆到慢病毒载体中,可实现hNT3基因的表达,且病毒滴度为5×107 TU/L.结论:成功构建表达人hNT3基因的慢病毒载体并能在293T细胞中扩增获得足够高的病毒滴度,可作为基因转染的有效工具在将来神经损伤修复实验研究中得到应用。
Key words ：
human neurotrophin-3
lentiviral vector
gene transfection
基金资助: 国家自然科学基金
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. 目录封面封底
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