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| SA/hIL24双功能融合蛋白的制备及其生物学活性的鉴定 |
| 陈惜倩，高基民 |
| 温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室,浙江温州,325035 |
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| Preparation and bioactivity evaluation of SA/hIL24 fusion protein |
| 引用本文: |
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陈惜倩,高基民. SA/hIL24双功能融合蛋白的制备及其生物学活性的鉴定[J]. 温州医科大学学报, 2013, 43(2): 78-83.
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| Cite this article: |
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摘要 目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素24融合蛋白(SA/hIL24),并鉴定其生物学活性.方法:通过RT-RCR扩增hIL-24基因序列,构建pET24a-SA-hIL24和pET21a-hIL24-SA重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和凝胶过滤层析纯化、透析复性.MTT法检测融合蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析融合蛋白对已生物素化的小鼠膀胱癌MB49细胞的锚定修饰效率.结果:成功构建两种融合蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中实现高效表达,表达量分别占菌体总蛋白的20％和35％,二次纯化后SA/hIL24融合蛋白纯度可达95％以上.SA/hIL24融合蛋白可高效结合至已生物素化的MB49肿瘤细胞表面(表面锚定修饰率大于90％),hIL24-SA融合蛋白可以剂量依赖的方式抑制Hela细胞的生长,而SA-hIL24融合蛋白对Hela细胞没有明显的抑制生长作用.结论:SA/hIL24融合蛋白的制备为hIL-24表面锚定修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供了基础.
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| 关键词 ：
白细胞介素24,
链亲和素,
融合蛋白,
原核表达
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| 基金资助:浙江省重大科技专项项目 |
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