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| microRNA-29b在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用 |
| 潘嘉林，黄晓燕，邵驾宇，王本极，林素，王良国，戴晓春，杨德业 |
| 温州医学院附属第一医院心内科温州医学院心血管生物和基因研究所,浙江温州,325000 |
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| The role of microRNA-29b in epithelial-mesenchymal transition of renal tubular epithelial cells induced by Angiotensin Ⅱ |
| 引用本文: |
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潘嘉林,黄晓燕,邵驾宇,等. microRNA-29b在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用[J]. 温州医科大学学报, 2013, 43(2): 71-77.
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摘要 目的:研究microRNA-29b(miR-29b)在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的角色.方法:实时定量PCR检测自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和Wistar-Kyoto (WKY)大鼠肾脏皮质组织miR-29b表达的差异.体外培养NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞,给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-7 mol/L(为AngⅡ组),以正常培养的细胞作空白对照,实时定量PCR检测AngⅡ组和正常对照组细胞miR-29b表达差异,运用WesternBolt技术和实时定量PCR技术分别检测AngⅡ组和空白对照组TGF-β、α肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达量.进一步分别再转染miR-29b inhibitor和miR-29b mimics,建立miR-29b低表达和高表达细胞模型.低表达模型实验分三组:①空白对照组:正常培养的肾小管上皮细胞未经任何处理；②低表达组:转染miR-29b inhibitor；③阴性对照组:转染随机合成NC microRNA片段.高表达模型实验分三组:①空白对照组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导；②高表达组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导,同时转染miR-29b mimcs；③阴性对照组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导,同时转染随机合成NC microRNA片段.用流式细胞仪技术检测转染率,用实时定量PCR检测转染效果,运用Western Bolt技术和实时定量PCR技术分别检测各组中TGF-β、α-SMA和Col Ⅰ的表达量.结果:实时定量PCR检测SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达(0.76±0.01)相比WKY大鼠(1.00±0.00)下降(P＜0.05),相比空白对照组(1.00±0.00),AngⅡ组miR-29b的表达(0.56±0.06)明显下降(P＜0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA表达和蛋白表达明显升高(P＜0.05).流式细胞仪技术检测NRK-52E细胞转染率为95.14％,相比空白对照组(1.00±0.00),低表达组miR-29b表达(0.07±0.02)明显下降,高表达组miR-29b表达(38.3±8.1)明显升高(P＜0.05).在低表达模型实验中,低表达组α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均上调(P＜0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).在高表达模型实验中,高表达组的NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β、Col I的mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均下调(P＜0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论:SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达水平比WKY大鼠下降,这可能和SHR大鼠体内的高AngⅡ水平有关,miR-29b表达降低能促进肾小管上皮细胞发生EMT,AngⅡ调节肾小管上皮细胞发生EMT的一个潜在的机制可能是通过miR-29b来实现的.
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| 关键词 ：
miR-29b,
自发性高血压大鼠,
血管紧张素Ⅱ,
肾小管上皮细胞,
上皮细胞-间充质转分化
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| 基金资助:卫生部科研基金资助项目温州市科技发展计划项目 |
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